ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Номер

24-005-06

Наименование проекта

Метод определения конечных продуктов липопероксидации (оснований Шиффа) в плазме крови и эритроцитах

Назначение

Сохранение здорового высокопродуктивного стада животных.

Рекомендуемая область применения

Для количественного определения конечных продуктов липопероксидации (оснований Шиффа) в плазме крови и эритроцитах с целью диагностики возможных заболеваний животных.

Описание

Описание к ИЛ № 24-005-06

            Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Принцип метода основан на осаждении из цельной крови при помощи этилендиаминтетраацетата (ЭДТА) эритроцитов и выделении центрифугированием эритроцитарной массы. После двукратной отмывки эритроцитов изотоническим раствором хлорида натрия, из них с помощью гептан-изопропанольной смеси экстрагируют липиды, из которых выделяют основания Шиффа.

Приборы: спектрофотометр, лабораторный встряхиватель.

Реактивы:

1. Натрия этилендиаминтетраацетат (ЭДТА), раствор 1 мг/мл.

2. Изотонический раствор, натрия хлорид, раствор 0,85%.

3. Смесь «гептан-изопропанол» (1:1) по объему.

4. Хлороводород, раствор, рН 2,0 (0,1 н. НСl с рН 1,1 разводят водой в соотношении 1:4).

Ход определения

Берут цельную кровь, в качестве консерванта используют ЭДТА натрия (0,5 мл 1%-го раствора ЭДТА на 5 мл венозной крови). После центрифугирования при 2000 об/мин в течение 8 мин. и отделения плазмы, полученную эритроцитарную массу трижды отмывают двукратным объемом изотонического раствора хлорида натрия с последующим центрифугированием при 3000 об/мин в течение 7 мин. Затем эритроцитарную массу разводят изотоническим раствором хлорида натрия в 2 раза.

К 0,2 мл плазмы крови или эритроцитов добавляют 4 мл смеси «гептан-изопропанол» (1:1) и встряхивают 10-15 мин. на лабораторном встряхивателе. Далее в пробирку добавляют 1 мл раствора хлороводорода (рН 2,0) и 2 мл гептана, интенсивно встряхивают и, после отстаивания и расслоения смеси (на что уходит 20-25 мин.), измеряют абсорбцию верхнего, гептанового слоя при длине волны 400 нм.

Результат выражают в усл. ед. по отношению к абсорбции при длине волны 220 нм.

Е400/Е220 = усл.ед. на 1 мл плазмы или на 1 мл эритроцитов.

Количественные сдвиги конечных продуктов липопероксидации (оснований Шиффа) в плазме крови и в эритроцитах позволяют судить о состоянии оксидантно-антиоксидантного баланса в мембранах внутренних органов - печени, почек, легких и др. Поэтому определение уровня оснований Шиффа в плазме крови и в эритроцитах в конечном итоге направлено на сохранение здоровья и поголовья высокопродуктивных животных.        

Преимущества перед известными аналогами

Метод прост, хорошо воспроизводим.

Стадия освоения

Внедрено в производство

Результаты испытаний

Технология обеспечивает получение стабильных результатов

Технико-экономический эффект

Снижение трудоемкости в 3 раза.

Возможность передачи за рубеж

Возможна передача за рубеж

Дата поступления материала

11.09.2006