ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Свободный аминный азот представляет собой азот свободных аминокислот, содержащихся в сыворотке (плазме) крови, тогда как общий аминный азот включает также азот сложных полипептидов и белков.

На кафедре биологической химии предложено при кислой реакции гомогенатов тканей или биологических жидкостей нейтрализвать ее с помощью 9,5 н. раствора гидроксида натрия. Для проведения цветной реакции предложен нингидриновый реактив, что обеспечивает протекание реакции при рН 6,0.

Приборы: фотоэлекроколориметр, центрифуга, гомогенизатор.

Ход определения. В центрифужные пробирки вносят 1 мл гомогената ткани (1:10), приготовленного на 0,05 М фосфатном буфере (1 мл биологической жидкости), и прибавляют равный объем 10%-го раствора трихлоруксусной кислоты, через 10 мин пробы центрифугируют при 2000 об/мин в течение 5 мин. К 1 мл надосадочной жидкости добавляют 1 мл раствора 0,04 н. уксусной кислоты, пробирки прикрывают пробкой и помещают в холодную баню, которую доводят до кипения. Пробы кипятят в течение 5 мин (время отмечают с момента закипания). Затем пробирки охлаждают и содержимое фильтруют. С этой целью в каждую пробирку вносят по 1 мл дистиллированной воды и после перемешивания тонкой стеклянной палочкой фильтруют через бумажный фильтр. Пробирку и осадок на фильтре промывают еще 2 раза по 1 мл дистиллированной воды, после чего основной фильтрат и обе промывные воды объединяют в одну пробирку с меткой, соответствующей 10 мл. Затем прибавляют по каплям 0,5 н. раствор гидроксида натрия до рН 5,0-6,0 (проверяют универсальной индикаторной бумажкой), добавляют 2 мл нингидринового реактива и кипятят 5 мин. Пробирку охлаждают в потоке водопроводной воды, оставляют стоять 5 мин при комнатной температуре и доводят дистиллированной водой до 10 мл.

Параллельно ставят контрольную пробу на реактивы. Для этого к 3 мл дистиллированной воды добавляют 1 мл 0,04 н. уксусной кислоты, нейтрализуют до необходимого рН раствором 0,5 н. гидроксида натрия, приливают 2 мл нингидринового реактива и кипятят 5 мин, охлаждают и доводят дистиллированной водой до 10 мл.

Оптическую плотность замеряют на фотоэлектроколориметре при зеленом светофильтре (длина волны - 536 нм) в кювете с длиной 5,0 мм, против контрольной пробы или воды.

Расчет производят по формуле путем сравнения показаний экстинкций опытной и стандартной проб (0,5 мл приготовленного стандартного раствора аланина обрабатывают точно так же, как 0,5 мл сыворотки крови), либо по калибровочной кривой, построенной по азоту аланина.

Результаты выражают в мкг азота на 100 мг ткани, либо в г/л для биологической жидкости.

В норме концентрация аминного азота в сыворотке крови животных составляет 0,020 - 0,050 г/л.

Применение данного метода в клинико-диагностических лабораториях может быть полезным для диагностики заболеваний печени у животных, поскольку увеличение содержания свободного аминного азота в крови наблюдается при целом ряде заболеваний печени, а также при нарушении функции печени при действии ксенобиотиков.