ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Молочная кислота - конечный продукт гликолиза и гликогенолиза, образуется в организме в результате восстановления пировиноградной кислоты в анаэробных условиях.

Принцип метода

Из молочной кислоты в присутствии серной, ортофосфорной кислот и солей меди образуется ацетальдегид, который, реагируя с пара-оксидифенилом, дает фиолетово окрашенные продукты.

Приборы: фотоэлектроколориметр, водяная баня.

Реактивы:

1. Серная кислота концентрированная, выдерживающая пробу Саваля.

2. Медно-фосфорный раствор. Готовят из 3 г сульфата меди и 9 мл ортофосфорной кислоты.

3. Пара-оксидифенил, раствор 1,5%-й в диметилформамиде.

4. Трихлоруксусная кислота (ТХУ), раствор 5%-й.

5. Стандартный раствор молочной кислоты. 180 мг молочной кислоты растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и доводят объем до 100 мл. Из этого раствора готовят серию разведений и используют для построения калибровочного графика.

Проведение анализа.

В пробирки вносят следующие реагенты (см.таблицу).

Выдерживают 3 - 5 мин., центрифугируют при 1500 об/мин в течение 10 мин.

Пробы энергично встряхивают и точно через 3 мин. ставят ровно на 3 мин. в кипящую водяную баню, затем через 3 мин. охлаждают. Добавляют 1 каплю пара-оксидифенила в диметилформамиде, встряхивают и оставляют стоять 10 мин при комнатной температуре. После этого нагревают на кипящей водяной бане 1,5 мин, охлаждают в воде и колориметрируют в кювете с толщиной слоя 5 мм при длине волны 565 нм против нулевой пробы. Расчет выполняют по калибровочному графику. Серию калибровочных проб вводят вместо центрифугата и в таком же объеме, обрабатывают дальше аналогичным образом и параллельно с опытными пробами.

В норме хорошо артериализованная кровь животных должна содержать молочной кислоты 1 - 1,5 ммоль/л. Увеличивается концентрация молочной кислоты в крови при мышечных нагрузках, при заболеваниях печени, опухолях, гипоксических состояниях, связанных с патологией сердца и легких, и может характеризовать заболевания печени у животных.