ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Исследование содержания фукозы в биологических жидкостях позволяет судить о метаболизме фукозосодержащих гликопротеинов и гликолипидов. Однако существу-ющие биохимические методы позволяют определять лишь суммарную фукозу.

Предлагается метод одновременного определения фукозы, не связанной с бел-ками, и фукозы в составе гликопротеинов, осаждаемых из сыворотки крови этанолом.

В работе использован принцип фотометрии хромогена, образованного последо-вательным воздействием на фукозу серной кислотой и гидрохлоридом цистеина при кипячении.

Приборы: спектрофотометр, фотоэлектроколориметр КФК-3, центрифуга, водя-ная баня.

Реактивы: 1. Этанол, 95% .

2. Натрия гидрооксид, раствор 0,1 н.

3. Цистеина гидрохлорид, раствор З%.

4. Серно-кислый реактив (6 объемов концентрированной серной кисло-ты и 1 объем дистиллированной воды).

5. Стандартные растворы фукозы и рамнозы, содержащие 10 и 20 мкг в 1 мл дистиллированной воды.

Ход определения

В две центрифужные пробирки вносят по 0,1 мл исследуемой сыворотки крови и 5 мл 95%-го зтанола. Содержимое пробирок тщательно перемешивают стеклянной палочкой и через 5 мин центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Из каждой пробы отмеряют по 1 мл надосадочной жидкости и переносят в пробирки, помещенные в воду со льдом (одна из них - контроль). Эти пробы будут служить для определения фукозы, не связанной с белками. Оставшуюся часть надосадочной жидкости удаляют.

К осадку приливают 5 мл 95%-го этанола, тщательно перемешивают, встря- хивают в течение 5 мин и центрифугируют при 3000 об/мин в течение 10 мин. Надосадочную жидкость удаляют. Дальше пробирки помещают в воду со льдом, осадок растворяют в 1 мл натрия гидроксида. Эти пробы будут служить для определения фукозы, связанной с белками (одна из них - контроль). Параллельно ставят две пробы с 0,1 мл стандартного раствора (одна из них - контроль), куда добавляют по 0,9 мл 95%-го этанола и одну холостую пробу (1 мл дистиллированной воды).

Для определения содержания фукозы во все пробирки, содержащие по 1 мл соответствующего материала и помещенные в воду со льдом, вносят по 4,5 мл серно-кислого реактива, охлажденного до 0 ^оС. Смесиосторожно, нотщательно, переме-шивают, не вынимая их из воды со льдом. Все пробирки с содержимым опускают в кипящую водяную баню на 3 мин (с момента закипания), охлаждают проточной водопроводной водой, добавляют по 0,1 мл раствора цистеина гидрохлорида (кроме контрольных проб) и оставляют смеси на 60-90 мин при температуре 18 - 24 ^оС для развития окраски. Оптическую плотность опытной и стандартной проб измеряют на спектрофотометре или фотоэлектроколориметре КФК-3 при длинах волн 396 и 430 нм против соответствующих контрольных проб. Затем находят разность величин экстин-кции Е = Е ₃₉₆ - Е ₄₃₀ отдельно для опытных и стандартных проб.

По калибровочной кривой, построенной с использованием разности величин экстинкций стандартных растворов, находят содержание фукозы и ее концентрацию выражают в миллиграммах на 1 л исследуемой биологической жидкости.

Измерение количества фукозы, не связанной с белками, и фукозы в составе гликопротеинов имеет значение для диагностики заболеваний, сопровождающихся распадом острофазных белков, иммунных комплексов и разрушением клеточных элементов, поэтому предлагаемый способ позволяет улучшить диагностику возможных заболеваний у животных, что в конечном итоге имеет значение для сохранения здоровья и поголовья высокопродуктивного стада.