ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Результат выполнения научно-исследовательской работы.

Эритроциты - наиболее многочисленные форменные элементы крови, основное содержание которых составляет гемоглобин. Мембрана клеток имеет двойной слой липидных и белковых компонентов и содержит большой набор ферментов.

На кафедре медицинской химии Кировского государственного медицинского института предложен метод обработки эритроцитовс выделением эритроцитарных мембран для использования в последующих биохимических определениях.

Принцип: венозную кровь разделяют на эритроцитарную массу и плазму, ко-торую отбирают в отдельную пробирку. Эритроцитарную массу отмывают изотони-ческим раствором и с помощью химических модификаций мембран эритроцитов подго-тавливают к последующим биохимическим исследованиям.

Приборы: центрифуга, фотоэлектроколориметр.

Реактивы:

1. Хлорид натрия, раствор 8,5 гл(изотонический раствор).

2. Изопропанол.

3. Этанол.

4. Гептан.

5. Реактивы для определения общих липидов, холестерола, триацилглицеринов, диеновых конъюгатов.

6. Реактивы для определения общего белка.

Ход определения

Взятую в центрифужную пробирку, куда предварительно внесен антикоагулянт, венозную кровь центрифугируют при 8000 об/мин в течение 10 мин и отбирают плазму. Эритроцитарную массу последовательно 3 раза отмывают троекратным объемом изо-тонического раствора, который каждый раз отбрасывают. Затем тщательно измеряют объем эритроцитарной массы и разводят в 2 раза изотоническим раствором хлорида натрия.

Для изучения липидного состава 1 мл полученной эритроцитарной взвеси сме-шивают с 3 мл изопропилового спирта, тщательно перемешивают стеклянной палочкой, встряхивают15 мин, затем центрифугируют 7 мин и добавляют 3 мл гептана, вновь встряхивают 15 мин, затем центрифугируют 7 мин и оставляют отстаиваться на 30 мин, отбирают гептановый (верхний) слой и определяют в нем липидный состав.

Для определения общегобелка в мембранах эритроцитов к 0,1 мл эритроци-тарной взвеси добавляют 0,5 мл дистиллированной воды для гемолиза, 0,6 мл этанола, встряхивают 15 мин.Вносят 0,2 мл концентрированной соляной кислоты и центрифу-гируют при 3000 об/мин в течение 20 мин. 0,08 мл надосадочной жидкости используют для определения белка биуретовым методом.

Расчеты проводят по калибровочным кривым.