ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Идитолдегидрогеназа (К.Ф.1.1.1.14) - это НАД ⁺ - зависимый фермент, обратимо катализирует окисление l-идитола в l-сорбозу

l-идитол + НАД ⁺«l-сорбоза + НАДН ₂.

Принцип способа основан на окислении идитола в присутствии НАД ⁺, что приводит к повышению оптической плотности, определяемой спектрофотометрически при 340 нм. Активность фермента прямо пропорциональна количеству образованного НАДН ₂.

В химически чистые центрифужные пробирки вносят 2,6 мл 0,05 моль/л трис-НСl буфера, рН 8,8, 0,1 мл 1 моль/л раствора сульфата магния, 0,1 мл 6 ммоль/л раствора НАД ⁺, 0,1 мл 30 ммоль/л раствора идитола (в контрольные пробы прибавляют 0,1 мл трис-НСl буфера) и ставят на 10 мин в водяной термостат при 37 ⁰С. Затем в контрольные и опытные пробы прибавляют 0,1 мл сыворотки крови, тщательно перемешивают стеклянной палочкой и инкубируют в течение 30 мин при 37 ⁰С в водяном термостате. Реакцию останавливают прибавлением 1 мл 1 н. раствора натрия гидроксида. Снова тщательно перемешивают пробы стеклянной палочкой и через 10 мин стояния при комнатной температуре пробы центрифугируют. В прозрачной надосадочной жидкости измеряют оптическую плотность при 340 нм против 0,25 н. раствора натрия гидроксида. Из показаний оптической плотности опытной пробы вычитают экстинкцию контрольной пробы. Количество образовавшегося НАДН ₂ находят по калибровочному графику.

Параллельно в исследуемой сыворотке крови определяют содержание белка биуретовым методом.

Активность идитолдегидрогеназы выражают в ммоль НАДН ₂, образованного при инкубации 1 л сыворотки крови в течение 1 мин при 37 ⁰С (Е/л), либо в течение 1 с (мккат/л).

В норме в сыворотке крови животных активность идитолдегидрогеназы равна нулю или очень небольшим величинам. Данный фермент содержится преимущественно в печени. Поэтому исследование активности идитолдегидрогеназы показательно для диагностики печеночной патологии.

Способ позволяет улучшить диагностику возможных заболеваний печени у животных.