ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Ферроксидаза (КФ 1.16.3.1) - медьсодержащий фермент, известныйтакже как церулоплазмин- компонентфракцииa-глобулинов сывороточных белков, может ферментативно окислять различные полиспирты, полифенолыи полиамины, такие как аскорбиновая кислота, гидрохиноны, катехоламины и 1,4-фенилендиамин.

Принцип способа основан на окислении 1,4-фенилендиамина при участии фер-роксидазы. Ферментативная реакция останавливается добавлением азида натрия. По величине оптической плотности образующихся хромогенов судят о концентрации ферроксидазы.

В химические пробиркивносят 0,1 мл сывороткикрови (без следовгемолиза). В одну из пробирок, служащуюконтролем, добавляют 2 мл раствора азида натрия (с цельюинактивации ферментативной активности ферроксидазы). Затемво все пробиркивносят по 8 мл ацетатногобуфера, рН 5,5 ипо1 мл раствора 1,4-фенилендиамина гидрохлорида, используемого в качестве субстрата. Содержимое пробирок перемешивают и помещают на 1 ч в ультратермостат при температуре 37 ⁰С. После инкубации во все пробирки, за исключением контрольной, добавляют по 2 мл раствора азида натрия. Содержимое пробирок тщательно перемешивают и пробирки выдерживают в холодильнике в течение 30 мин при температуре +4 ⁰С. Оптическую плотность проб измеряют на фотоэлектроколориметре против контроля в кюветах с толщиной слоя 10 мм при длине волны 530 нм. Умножая значения оптической плотности на коэффициент пересчета 875, получают величину концентрации ферроксидазы в мг/л.

Повышение уровня ферроксидазы в сыворотке крови отмечается при заболеваниях печени, анемиях и характеризуется параллельным нарушением обмена меди в организме.

Способ позволяет улучшить диагностику возможных заболеваний у животных, а также осуществлять биохимический контроль при лечении заболеваний, протекающих с симптомами гипоцеррулоплазминемии на фоне увеличения содержания свободной меди в сыворотке крови, ткани печени и других органов.