ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Способ основанна фотометрии хромогена, образованного в условиях осаждения гликопротеинов спиртом и последовательного воздействия серной кислотой и орцином.

В центрифужные пробирки наливают по 0,1 мл исследуемой сыворотки крови и 5 мл 96%-гоэтанола. Содержимое тщательно перемешиваютичерез 5 мин центри-фугируютв течение 10 мин при 3000 об/мин.Надосадочнуюжидкость удаляют. Про-бирки опрокидывают на фильтровальную бумагу (30-60 с), к осадкудобавляют 5 мл96%-гоэтанола, тщательно перемешивают стекляной палочкой, смесь центрифугируют, надосадочную жидкость вновь удаляют. Отмытый осадок протеинов растворяют в 1 мл 0,1 н. раствора натрия гидроксида, добавляют8,5 мл орцинового реактива (1 ч 1,6%-го раствора орцина и7,5 ч40%-й серной кислоты), содержимое пробирок хорошо пере-мешиваютпутем их переворачивания и помещают в водяную баню при температуре 80 ⁰С точно на 15 мин. Следует избегать попадания на пробирки дневного света. Затем пробирки охлаждают в темноте в воде со льдом (или в проточной воде из водопроводного крана)в течение 5 мин. Оптическую плотность проб измеряютна фотоэлектро-колориметре при длиневолны500-560нмв кювете с длиной оптическогопути 10ммпротив контроля (к 1мл0,1 н. раствора натрия гидроксида добавляют 8,5 мл орци-нового реактива). Далее обрабатывают аналогично как и опытную пробу.

Расчет производят по калибровочному графику. Для его построенияготовят стандартный раствор гексоз, состоящий из галактозыи маннозы.45 мг галактозы и 45 мг маннозы растворяют в небольшом количестве дистиллированной воды и затем доводят объем водой до метки. В связи с тем, что оба вещества имеют одинаковую молекулярную массу, получается раствор, содержащий смесь гексоз в общей концентрации 5 ммоль/л. Из основного стандартного раствора делают разведения: 0,05 - 0,3 мл основного стандартного раствора доводят дистиллированной водой до объема 1 мл, приливают 8,5 мл орцинового реактива и обрабатывают дальше так же, как и опыт.Калибровочную кривую получают, руководствуясь общепринятымипринципами.

Повышение уровня гликопротеинов в сыворотке крови отмечается при заболеваниях печени и соединительной ткани и характеризуется усилением процессов деградации гликозаминогликанов, галактогликопротеинов и соремукоидов у животных.

Способ позволяетулучшитьдиагностикувозможныхзаболеваний у животных, что в конечном итоге имеет значение для сохранения здоровья и поголовья высокопродуктивного стада.