ИННОВАЦИИ БИЗНЕСУ

Принцип способа заключается в том, что при температуре +55…+65 ⁰С хлорное железо вступает в реакцию и со свободным, и с эфиросвязанным холестерином, в то время как при +20 ⁰С хлорное железо в течение первых 2 ч реагирует только со свободным холестерином.

Определение состоит из двух этапов: вначале определяют свободный холестерин, потом суммарное количество свободного и эфиросвязанного холестерина.

В пробирку отмеривают 2 мл 0,1%-го раствора хлорного железа в ледяной уксусной кислоте, после чего микропипеткой осторожно наносят на стенку пробирки 0,02 мл сыворотки или плазмы крови (без следов гемолиза). Содержимое пробы хорошо перемешивают и оставляют стоять на 60 мин при +20…+22 ⁰С (через каждые 20 мин необходимо пробы встряхивать). Измерение оптической плотности производят на фотоэлектрокалориметре в кюветах с рабочей длиной 5 мм при длине волны 570 нм против цветного реактива. После определения экстинкции свободного холестерина смесь не выливают, а используют для дальнейшего определения. Пробирку помещают в термостат при температуре +60 ⁰С на 15 мин, затем извлекают, охлаждают до комнатной температуры и определяют на фотоэлектроколориметре экстинкцию общего холестерина аналогичным способом.

Параллельно обрабатывают 0,02 мл стандартного раствора холестерина.

Расчет проводят по формуле

Соп = Еоп Ч Сст/Ест

где: Соп - концентрация холестерина,

Еоп - экстинкция опытной пробирки,

Сст - концентрация стандартного раствора холестерина,

Ест - экстинкция стандартного раствора холестерина.

Увеличение концентрации холестерина в сыворотке крови отмечается при заболеваниях печени, почек и, особенно, при сахарном диабете и липоидном нефрозе. Определение свободного, общего и эфиросвязанного холестерина значительно расширяет диагностические возможности исследования обмена липидов. Поэтому способ позволяет улучшить диагностику возможных заболеваний у животных, что в конечном итоге имеет значение для сохранения здоровья и поголовья высокопродуктивного стада.